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公司動態

恒溫消解在蛋白質測定中的應用

閱讀:6407          發布時間:2018-9-28

恒溫消解在蛋白質測定中的應用

 

蘇敬武   叢偉紅   車燕妮

(威海市衛生防疫站  威海  264200)

本文摘自《中國食品衛生雜志》2001年第13卷第4期

 

    凱氏定氮法測定蛋白質的含量,是zui常用的蛋白質測定方法,但樣品的消解費事費時,一般一臺電爐一天zui多消化兩個樣品。我們采用型恒溫消解儀進行蛋白質消解,4~6小時可同時消化16個樣品。

1  實驗方法

1.1  儀器及試劑

1.1.1  儀器

    DTD-40型恒溫消解儀(北京中衛食品衛生科技公司出品);平底硬質玻璃消化管;定氮蒸餾裝置。

1.1.2  試劑

    硫酸銅;硫酸鉀;硫酸;過氧化氫;20g/L硼砂溶液;混合指示劑:2份1g/L甲基紅乙醇溶液與5份2g/L溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合;400g/LNaOH溶液;C(HCl)=0.02000mol/L的鹽酸標準滴定溶液。

1.2  實驗操作

1.2.1  樣品消解

    稱0.2-2.0g固體樣品或5-10g液體樣品于平底玻璃消化管中,加0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻后于管口放一小漏斗,置于恒溫消解儀中,300℃左右,小心加熱,一般2h內,管內容物可全部炭化,泡沫*停止。將溫度降至240℃左右,分幾次向管內共加10ml過氧化氫,提高溫度至390℃左右,繼續消化,至液體呈藍綠色澄清透明后,再繼續加熱30min,放冷后,定容100ml,混勻備用。取與處理樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸、過氧化氫按同一方法做試劑空白實驗。

    本方法全部消化過程約需4-6h,一次zui多可消化16個樣品。

同時使用普通電爐進行蛋白質消解,進行比較實驗。

1.2.2  定氮測定

    按國家標準[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白質的測定方法(4.3)微量定氮法進行操作。

2 結果及討論

2.1 樣品的用量:根據不同的蛋白質含量,取0.2g-2.0g樣品,置消化管內進行消解,在300℃初始消解無外溢現象。樣品先加酸放置過夜,可加快消解速度。開始消解時,由于消解溫度恒定,消解管整體受熱均勻,一般泡沫不能溢出管外,較直接電爐消解容易控制。

2.2 消解溫度:初始消解時溫度不可過低,過低造成消化時間延長。實驗證明初始消解溫度300℃為宜。只要消解管內無泡沫產生,應及時把溫度提高到390℃左右,以加快消解速度。

2.3 不同消解方法蛋白質測定結果的比較:對保健品、乳及乳制品等15份樣品,用凱氏燒瓶和恒溫消解儀消化樣品,分別測定蛋白質含量,結果比較如下:

1  兩種消解方法蛋白質測定結果比較(%)

      樣品號

 普通電爐消解法

  恒溫消解儀法

        1

      16.3

     17.0

        2

      30.8

     33.8

        3

      23.0

     22.2

        4

      3.25

     3.33

        5

      3.38

     3.59

        6

      1.44

     1.27

        7

      0.510

     0.555

        8

      0.490

     0.477

        9

      0.842

     0.891

        10

      2.95

     3.01

        11

      0.576

     0.627

        12

      0.574

     0.579

        13

      0.572

     0.630

        14

      0.319

     0.327

        15

      0.319

     0.337

    T=1.033; T[14,0.05)=2.145,P>0.05

    兩種方法消化樣品,蛋白質含量測得結果經統計學處理表明無顯著差異。

              

1  GB/T 5009-1996  食品衛生檢驗方法(理化部分)

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