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技術文章

土壤蔗糖酶檢測試劑盒資料-齊一生物

閱讀:344          發布時間:2018-9-26

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說明書
For Research Use Only
僅供研究用
貨號:QYS-235096
分光光度法 50 管/24 樣

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說明書測定意義:

S-SC 能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收,其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、磷含量,微生物數量及土壤呼吸強度密切關,是評價土壤肥力的重要指標。
測定原理:

S-SC 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范圍內 510nm 光吸收增加速率與 S-SC 活性成正比。
自備用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 40mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說明書測定步驟和加樣表:

試劑名稱    測定管        對照管
                    
風干土樣(g)    0.1            0.1
試劑一(μL)    15            15
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴 15min    
試劑二(μL)        250            250
試劑三(μL)        750            
蒸餾水(μL)                    750
                    

充分混勻,放入 37℃水浴培養 24 小時,10000 g,4℃,離心 5min,取上清液

上清液(μL)    200    200
試劑四(μL)    500    500

充分混勻,放入沸水浴中煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,蒸餾水稀釋 10 倍后(可以吸取 100μL,加入 900μL 蒸餾水稀釋;如果吸光度大于 4,可以適當加大稀釋倍數),510nm 處蒸餾水調零,讀吸光值 A。計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。


S-SC 活性計算:

標準條件下測定的回歸方程為 y = 4.9x -0.062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。單位的定義:每天每 g 土樣中產生 1mg 還原糖定義為一個 S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.7×(ΔA+0.062) 10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:1.015mL;W:樣本質量,

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